Nucleic Zuur Kenmerkende Uitrusting nieuwe van Coronavirus (2019-nCoV)
(PCR-Fluorescentie die sonderen)
Bestemming
De nieuwe Nucleic Zuur Kenmerkende Uitrusting van Coronavirus (2019-nCoV) (PCR-Fluorescentie die sonderen) wordt gebruikt voor kwalitatieve opsporing van de genen van ORF1ab en n-van nieuwe coronavirus (2019-nCoV) in nasopharyngeal zwabber, oropharyngeal zwabber, alveolare lavagevloeistof, sputum, serum, geheel bloed en faecaliën van veronderstelde longontstekingsgevallen met nieuwe coronavirusbesmetting, patiënten met veronderstelde clusters van nieuwe coronavirusbesmetting, en andere patiënten die diagnose of differentiële diagnose van nieuwe coronavirusbesmetting vereisen.
Voor kenmerkend slechts gebruik in vitro. Voor professioneel slechts gebruik.
Samenvatting
De definities van „veronderstelde gevallen“ en de „veronderstelde clusters van patiënten“ zullen worden bepaald door naar het „van de Longontstekingsdiagnose en Behandeling Programma voor Nieuwe Coronavirus-Besmetting“ en „Longontstekingsgeval Controleprogramma voor Nieuwe die Coronavirus-besmetting“ te verwijzen door CDC van China (currentversion) wordt uitgegeven.
De nieuwe Nucleic Zuur Kenmerkende Uitrusting van Coronavirus (2019-nCoV) (PCR-Fluorescentie die sonderen) wordt slechts gebruikt voor de hulpdiagnose van verwante gevallen en de noodsituatiereserve voor diagnose in vitro tijdens de longontstekingsuitbarsting van besmetting de nieuwe van Coronavirus (2019-nCoV zou) sinds December2019, deze uitrusting niet moeten worden gebruikt routine kenmerkend in vitro in klinische praktijk.
Gelieve te voldoen de relevante vereisten van het „van de Longontstekingsdiagnose en Behandeling Programma voor Nieuwe Coronavirus-Besmetting“, „Longontstekingspreventie en Controleprogramma voor Nieuwe Coronavirus-besmetting“ en andere documenten in gebruik.
De nieuwe nucleic zuurtests zouden van Coronavirus aan „Technische Richtlijnen voor Laboratoriumtest van Nieuwe Coronavirus in CDC van China moeten voldoen“ en goede biologische veiligheid houden.
Testprincipe
Door fluorescentie kwantitatieve technologie rechts-PCR In real time op het fluorescentie kwantitatieve PCR instrument toe te passen, gebruikt deze test nieuwe coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab en de specifieke behouden opeenvolging van codage nucleocapsid eiwitn gen aangezien de doelgebieden die voor de behouden opeenvolging van de dubbel-doelgenen worden ontworpen, om opsporing van steekproefrna door fluorescent signaal te bereiken verandert.
Het PCR opsporingssysteem gebruikt de positieve interne controle, die de aanwezigheid van PCR inhibitors in testspecimens door te ontdekken controleert of het interne controlesignaal normaal, is om een vals negatief resultaat te vermijden.
Componenten van de Kenmerkende Uitrusting
Deze uitrusting is een reagens van de versterkingsreactie en bevat de volgende componenten:
| Nr. |
Reagensnaam |
Spec. & Qty |
Hoofdingrediënten |
| 24 T |
48 T |
| 1 |
2019-nCov-PCR Mengeling |
624µL/tube x 1 |
1248µL/tube x 1 |
Eerste ministers (4,62%), Sondes (1,15%), dNTPs (3,85%), MgCl2 (0,77%), Rnasin (0,48%),
PCR Buffer (89,13%)
|
| 2 |
2019-nCov-PCR-enzym Mengeling |
96µL/tube x 1 |
192µL/tube x 1 |
Rechts-Enzym (62,5%),
Taqenzym (37,5%)
|
| 3 |
2019-nCov-PCR-positief Controle |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Transcriptional RNA die in vitro Doelgenen (het gen van ORF1 ab, n-) bevatten en interne standaardgenfragmenten (RN-ase P) |
| 4 |
2019-nCov-PCR-negatief Controle |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Normale Zout |
Specimenvereisten
1. Toepasselijk specimentype: nasopharyngeal zwabber, oropharyngeal zwabber, alveolare lavagevloeistof, sputum, serum, geheel bloed en faecaliën.
2. Inzameling van specimen
Nasopharyngeal zwabber/oropharyngeal zwabber: Verzamel steekproef overeenkomstig de relevante bepalingen van " de Methode van de Specimeninzameling“ in de „Technische Gids van het Longontstekingslaboratorium voor Nieuwe Coronavirus-Besmetting“ van „van de Longontstekingspreventie en Controle Plan voor Nieuwe Coronavirus-Besmetting“. Men bewijst dat de zwabber van nylon bemonsteringshoofd en ABS bemonsteringsstaaf voor steekproefinzameling kan wordt gemaakt worden geselecteerd die.
Nasopharyngeal zwabber: De buis van de specimeninzameling met de streepjescode eerst moeten zou worden gekleefd, zou de nasopharyngeal zwabber within3-dagen na het begin van de ziekte zo ver mogelijk moeten worden verzameld. Gebruik zwabber om de lengte tussen topnasi en oorlel te meten, dan teken met vinger. Neem de zwabber in de neusholte in richting van loodlijn op aan de neus (gezicht). De zwabber zou de opgenomen minstens helft van de lengte van de oorlel moeten zijn aan topnasi. Maak de zwabbereinden in de neusjaren '30 van for15 ~, zacht rotate3 ~ 5 keer, snel gezette zwabber in de buiscotaining2 ml Lysis van de specimeninzameling Buffer (zelfde zoals Lysis Buffer in de Reagens van de Steekproefversie) of de Reagens die van de Steekproefopslag de inhibitor van het RNAenzym bevatten. Neem de zwabber op, dan onderbreking de steriele zwabberstaaf dichtbij de bovenkant, buis GLB en verbinding met het verzegelen van film aanhaalt.
Oropharyngeal zwabber: De buis van de specimeninzameling met de streepjescode eerst moeten zou worden gekleefd, zou de oropharyngeal zwabber binnen 3 dagen na het begin van de ziekte zo ver mogelijk moeten worden verzameld. Een steriele het bijeenkomen zwabber zou voor bemonstering moeten worden gebruikt, matig de latere pharyngeal muur afvegen, vermijdt ontroerend de tong. Plaats snel een steriele die zwabber in de inzamelingsbuis voor inzameling van oropharyngeal zwabber wordt gebruikt. Breek de steriele zwabberstaaf dichtbij de bovenkant, haal buis GLB en verbinding met het verzegelen van film aan.
Alveolare lavagevloeistof: Strenge patiënten of patiënten met longontsteking die snel vorderen. Werker uit de gezondheidszorg extract≥5ml BALF in een aseptische die container van 50ml met steekproefstreepjescode en schroefdeksel door aseptische verrichting wordt geëtiketteerd. Verzamel specimen, dan haal buis GLB en verbinding met het verzegelen van film aan.
Sputum:
De buis van de specimeninzameling met de streepjescode eerst moeten zou worden gekleefd. Open niet de luchtroute om specimens te verzamelen wanneer het verzamelen van sputum. Het sputum van de Collect.deephoest in een beschikbare aseptische bemonsteringskop met schroefdeksel, laadt 2 ml-protease K (1g/L) in bemonsteringskop. Verzamel sputum, dan haal buis GLB en verbinding met het verzegelen van film aan. Verzend zo ver mogelijk naar opsporing binnen 30 min. De protease K zou niet eerst moeten worden toegevoegd als de specimens over lange afstanden moeten worden vervoerd.
Geheel bloed:
De bloedmonsters kunnen binnen 7 dagen na het begin of de kritieke die patiënten, of de patiënten worden verzameld met viremia worden overwogen. De buis van de specimeninzameling met de streepjescode eerst moeten zou worden gekleefd. Verzamel 2~4ml van bloedmonsters in de vacuümbuis die van de bloedinzameling EDTAantistollingsmiddel bevatten.
Faecaliën:
Voor patiënten met gastro-intestinale symptomen zoals diarree in het vroege stadium van de ziekte, domein3~5g (sojaboongrootte) faecaliën. De buis van de specimeninzameling met de streepjescode eerst moeten zou worden gekleefd. Verzamel steekproef in de buis van de specimeninzameling met schroefdeksel die 2ml bevatten normale verzegelt zout (de inhibitor van het RNAenzym kan worden toegevoegd wanneer voorwaardenvergunning) dan met het verzegelen van film.
Na steekproefinzameling, wordt het geadviseerd om in de Reagens van de Steekproefopslag voor behoud te plaatsen.
Men heeft bewezen dat de behoudsoplossing, zoals normale zout, TE-buffer die, 24M guanidine (zoals guanidine waterstofchloride) bevatten ook als Reagens van de Steekproefopslag voor steekproefbehoud kan worden gebruikt. De Reagens die van de Steekproefopslag guanidine bevatten die kan niet direct aan de Reagens worden aangepast van de Steekproefversie door Sansure Biotech Inc. voor nucleic zuurextractie wordt vervaardigd. Indien nodig, wordt het geadviseerd om van Nucleic Zuur (DNA/RNA) Extractie of Reiniging Uitrusting (Magnetische parelsmethode) te gebruiken (Referentienummer: S1002E) vervaardigd door Sansure Biotech Inc. of Viraal RNA Mini Kit van QIAamp (50) vervaardigde door QIAGEN voor nucleic zuurextractie.
3. Opslag en levering van specimens:
De te testen specimens kunnen onmiddellijk worden verwerkt, specimens die binnen 24 uren kunnen de moeten worden getest bij 4℃ worden opgeslagen. De specimens die niet binnen 24 uren kunnen worden ontdekt zouden bij -70℃ moeten worden opgeslagen of hieronder (bij gebrek aan -70℃ opslagvoorwaarden, kunnen de te testen specimens bij -20℃ 10 dagen worden opgeslagen, kan nucleic zuur bij -20±5℃ 15 dagen worden opgeslagen). De veelvoudige vorst/dooicycli zouden moeten worden vermeden. De specimens zouden in een verzegelde bevroren waterkruik met ijs of in een verzegelde schuimdoos met ijs moeten worden vervoerd. De inactivering van steekproeven bij 56℃ voor 30min zal niet de opsporing van deze uitrusting beïnvloeden.
Resultaatanalyse (verwijs naar gebruikershandleiding van instrument om de montages aan te passen.)
De resultaten zullen automatisch worden bewaard wanneer de reacties worden voltooid. Analyseer versterkingskromme van doel van opsporing en interne controle. Pas Begin, Beëindigen en Drempelwaarden van Basislijn van de grafiek volgens analyseresultaat (aan de Gebruikers kunnen de waarden volgens de daadwerkelijke situatie aanpassen. De beginwaarde kan tussen 3-15, en Beëindigenwaarde tussen 5-20 worden geplaatst. Pas vlak de versterkingskromme van negatieve controle om te zijn of onder drempel aan). Klik „Analyze“ om de analyse uit te voeren, ervoor zorgen elke parameter aan de vereisten voldoet dat in „Kwaliteitscontrole worden gegeven“. Ga venster „plateren“ om kwalitatieve resultaten te registreren.
Kwaliteitscontrole
| Punt |
2019-nCoV-PCR-negatief Controle |
2019-nCoV-PCR-positief Controle |
| Ct waarde |
Geen Ct of Ct > 40 bij kanaal FAM, ROX en HEXUITDRAAI
(Interne Controle)
|
≤ 35 bij kanaal FAM, ROX en HEXUITDRAAI
(Interne Controle)
|
Het testresultaat wordt behandeld geldig als alle voorwaarden in bovengenoemd voor dezelfde test worden voldaan aan. Anders wordt het testresultaat behandeld als ongeldig en moet worden opnieuw getest.
Verklaring van Opsporingsresultaat
| Conclusie |
Versterkingsresultaten |
| 2019-nCoV positief |
Er zijn typische die s-Vorm versterkingskromme bij het kanaal van FAM wordt ontdekt en/of ROX-, en de versterkingskromme die bij HEXUITDRAAIkanaal, Ct≤40 wordt ontdekt. |
| 2019-nCoV verbied |
Er zijn geen typische s-Vorm versterkingskromme of Ct (Geen Ct) > 40 ontdekt bij het kanaal van FAM en ROX-, en de versterkingskromme die bij HEXUITDRAAIkanaal, Ct ≤ 40 wordt ontdekt. |
Er is geen typische die s-Vorm versterkingskromme bij het kanaal van FAM, van ROX en van de HEXUITDRAAI (Geen Ct) wordt ontdekt, of Ct > 40. Het is erop gewezen dat de concentratie van het specimen te laag is, of er zijn mengende substanties die de reactie remmen. Het testresultaat is ongeldig. Een onderzoek zou moeten worden uitgevoerd om de redenen te weten te komen en uit te sluiten, alstublieft specimen opnieuw verzamelen en de specimens opnieuw testen.
Nota: Voor virusculturen, zijn er geen eisen ten aanzien van de interne resultaten van de controletest.
Opslag en Stabiliteit
1. De kenmerkende uitrusting zou moeten in een verzegelde zak bij-20±5°C worden opgeslagen en tegen licht worden beschermd. De uitrusting is voorlopig geldig 6 maanden.
2. Gelieve te verwijzen naar de fabricagedatum en vervaldatum op de buitenverpakking.
3. De reagentia houden binnen de vervaldatum geldig en stabiel als gebruikt niet. Zolang de container van de reagens wordt geopend, zouden de vorst/dooicycli geen drie moeten overschrijden.
Compatibel Instrument
De kenmerkende uitrusting is van toepassing op slan-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, doctorandus in de letteren-6000PCRinstrument.
Uw bericht moet tussen de 20-3.000 tekens bevatten!
